Определение группы крови по системе АВО – важность процедуры и особенность методики

Группа крови и резус-фактор

Комплексное исследование, позволяющее оценить принадлежность крови пациента к одной из групп по системе ABO и определить наличие/отсутствие Rh-антигена.

Группа крови по системе ABO, Rh-фактор.

Синонимы английские

Blood typing, ABO group, Rh type.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.

Общая информация об исследовании

Каждый человек обладает уникальным сочетанием антигенов на поверхности своих клеток, в том числе и эритроцитов. На сегодняшний день известно более 250 антигенов эритроцитов, образующих около 30 антигенных систем. В клиническом плане наиболее важными из них являются система АВО и система резус.

Система АВO – основная система совместимости крови. Она представлена агглютиногенами A и B, являющимися гликопротеинами и расположенными на поверхности эритроцитов, и агглютининами альфа и бета, относящимися к классу иммуноглобулинов IgM и циркулирующих в плазме крови. В зависимости от комбинации этих агглютиногенов и агглютининов, выделяют 4 группы крови по системе АВО.

Первая (I) группа крови (самая распространенная в европейской популяции, 42 % населения) также называется O-группа, при ней на поверхности эритроцитов агглютиногены A или B отсутствуют, в плазме выявляются агглютинины альфа и бета.

Вторая (II) группа крови (37 %) также называется A-группа, на поверхности эритроцитов присутствует агглютиноген A, в плазме выявляется агглютинин бета.

Третья (III) группа крови (13 % населения) также называется B-группа крови, на поверхности эритроцитов присутствует агглютиноген B, в плазме выявляется агглютинин альфа.

Четвертая (IV) группа крови (самая редкая, всего 8 % населения) также называется AB-группа крови, на поверхности эритроцитов присутствуют агглютиногены обоих типов A и B, в плазме агглютинины альфа и бета отсутствуют.

Система резус также состоит из нескольких антигенов, главный из которых называется антиген D, или резус-фактор. Примерно у 85 % людей на поверхности эритроцитов можно выявить резус-фактор (резус-положительная кровь).

Принадлежность крови человека к определенной группе по системе АВО и системе резус является генетически обусловленной и не меняется в течение всей жизни.

Определение группы и резус-фактора крови имеет наибольшее значение при подготовке к переливанию крови. Такая необходимость может возникнуть при тяжелой кровопотере, тяжелых формах гемолитических анемий, заболеваниях костного мозга с нарушением нормальной продукции эритроцитов, а также при проведении объемных хирургических операций. Группу крови по системе ABO и системе резус учитывают не только при переливании эритроцитарной массы, но также и при переливании других компонентов крови (тромбоцитарная масса, лейкоцитарная взвесь и др.). Определение группы крови является обязательным тестом при беременности. В этом случае данные о группе крови пациентки и в некоторых случаях о группе крови отца ребенка учитываются для своевременной диагностики и лечения иммунологического конфликта (обусловленного несовместимостью крови плода и матери) и возникающего при этом гемолиза эритроцитов плода. Обязательному обследованию на группу крови и резус-фактор также подлежат военнослужащие, бойцы МЧС и других силовых структур.

Следует отметить, что в клинической практике используют несколько приемов для подтверждения совместимости крови донора и реципиента, в том числе раздельное лабораторное определение группы крови донора и реципиента, проба на индивидуальную совместимость эритроцитов донора и сыворотки реципиента, биологическая проба. Эти мероприятия выполняются потому, что вероятность ошибки при лабораторном определении группы крови небольшая, но все же существует.

Так как в основе лабораторного метода определения групп крови лежит реакция агглютинации, то наличие в сыворотке больного специфических белков (М-протеина, холодовых антител) или некоторых бактерий, препятствующих этой реакции, может приводить к получению ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Также прием некоторых лекарственных препаратов может отражаться на результатах определения резус-фактора. Поэтому особое внимание следует уделить подготовке к тесту.

Для чего используется исследование?

  • Для определения принадлежности группы крови человека к одной из групп по системе АВО и системе резус.

Когда назначается исследование?

  • При переливании компонентов крови реципиенту;
  • при сдаче крови донором;
  • при подготовке к хирургическим операциям;
  • при планировании беременности или во время беременности;
  • при подозрении на фетальный эритробластоз;
  • при подготовке к трансплантации костного мозга, почки, печени и других органов и тканей;
  • при поступлении на военную службу, в ряды МЧС и другие силовые структуры.

Что означают результаты?

Результаты определения группы крови по системе АВО

Агглютиногены на поверхности эритроцитов

Агглютинины в сыворотке крови

Группа крови, обозначение римскими цифрами

Группа крови, обозначение латинскими буквами

Группа крови ABO

Группа крови ABO – это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. Определение группы крови имеет огромное значение при переливании крови и её компонентов.

Группа крови, определение группы крови.

ABO Grouping, Blood Typing, Blood Group, Blood Type.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона жирную пищу за 24 часа до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Группа крови АВO – это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. ABO (читается как «а-бэ-ноль») является самой распространенной системой групп крови в России.

Эритроциты на своей поверхности несут сигнальные молекулы – антигены. Двумя основными антигенами, встроенными в молекулу эритроцитов, являются антигены А и В. Группы крови определяются на основании наличия или отсутствия этих антигенов. Кровь людей, у которых на эритроцитах присутствует антиген А, относится к второй группе – A (II), кровь тех, у кого на эритроцитах – антиген В, относится к третьей группе – B (III). Если на эритроцитах присутствуют и антигены А, и антигены В – это четвертая группа – AB (IV). Бывает и так, что в крови на эритроцитах не определяется ни одного из этих антигенов – тогда это первая группа – O (I).

В норме организм вырабатывает антитела против тех антител (А или В), которых нет на эритроцитах. То есть у лиц со второй группой крови – А(II) – на эритроцитах присутствуют антигены A, в которых будут содержаться антитела к антигенам В – обозначаются как ?. Так как одноименные антитела и антигены (A и ?, B и ?) вступают друг с другом в реакцию и приводят к склеиванию эритроцитов, они не могут содержаться в крови у одного человека.

Открытие групповой системы ABO позволило понять, почему переливание крови иногда происходило удачно, а иногда вызывало тяжёлые осложнения. Было сформулировано понятие совместимости групп крови. Например, если человеку со второй группой крови – А(II), которая содержит антитела к антигену В, перелить третью группу крови – B (III), произойдет реакция между антигенами и антителами, которая приведёт к склеиванию и разрушению эритроцитов и может иметь тяжёлые последствия вплоть до летального исхода. Поэтому группы крови при переливании обязательно должны быть совместимы.

Группа крови определяется по наличию или отсутствию склеивания эритроцитов с использованием сывороток, содержащих стандартные антигены и антитела.

В центрах переливания крови на пакетах с кровью или с её компонентами, полученными от доноров, помечается «O (I)», «A (II)», «B (III)» или «AB (IV)», что позволяет быстро найти кровь нужной группы, когда она требуется.

Для чего используется исследование?

Чтобы узнать, какую кровь можно безопасно переливать пациенту. Крайне важно убедиться, что донорская кровь совместима с кровью реципиента – человека, которому её собираются переливать. Если в донорской крови или её компонентах есть антитела к антигенам, содержащимся на эритроцитах реципиента, то может развиться тяжелая трансфузионная реакция, вызванная разрушением эритроцитов в сосудистом русле.

Когда назначается исследование?

  • Перед переливанием крови – как тем, кому оно требуется, так и донорам.

Переливание крови и её компонентов чаще всего требуется в следующих ситуациях:

    • тяжёлая анемия,
    • кровотечение, возникшее во время или после операции,
    • тяжёлые травмы,
    • массивная кровопотеря любого происхождения,
    • онкологические заболевания и побочные эффекты химиотерапии,
    • нарушения свёртываемости крови, в частности гемофилия.
  • Перед хирургическим вмешательством.

Что означают результаты?

Результаты показывают принадлежность крови человека к одной из четырёх групп, в зависимости от наличия антигенов на эритроцитах и антител, присутствующих в крови.

Определение группы крови в системе АВО

Для предотвращения осложнений при переливании крови вследствие реакции агглютинации необходимо предварительно определять группу крови человека.

Цель работы: определить группы крови в системе АВО (с помощью цоликлонов).

Оснащение: цоликлоны, стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования — человек.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины (антитела).

На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно следующие агглютинины: I-α и β, II-β и III – α. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество её в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.

1. Если агглютинации нет во всех трёх каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.

2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины α + β и α, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит II (А) группе.

3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины α + β и β, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III (В) группе.

4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно α + β, β и α агглютинины, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV (АВ) группе.

В последнее время определение групп крови человека системы АВО проводят с помощью цоликлонов Анти-А и Анти-В (антитела моноклональные Анти-А и Анти-В), которые применяют или взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Таблица 1. Оценка результатов определения групп крови с применением цоликлонов

Результаты реакции с цоликлономГруппа крови
Анти-ААнти-В
0 (1)
+А (II)
+В(III)
++АВ (IV)

Проведение работы. Нанесите на пластину индивидуальными пипетками цоликлоны Анти-А и Анти-В по одной большой капле. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.

Оформление протокола. Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите: реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь и кровь какой группы можно переливать вам?

Ситуационные задачи для определения конечного уровня знаний студентов:

При длительном голодании у людей появляются так называемые голодные отёки. В чём причина?

Человек съел недоброкачественную пищу. Через некоторое время у него обнаруживается повышение вязкости в крови. Чем можно объяснить это?

При исследовании крови обнаружено, что 80% гемоглобина составляет фетальный гемоглобин. Кому принадлежит кровь?

При подсчёте в больших квадратах камеры Горяева оказалось 580 эритроцитов. Сколько их содержится в 1мл крови, если кровь в меланжер набиралась до метки 0,5?

В 25 больших квадратах камеры Горяева оказалось 100 лейкоцитов. Сколько их содержится в 1мм 3 крови, если она набиралась в меланжер до метки 0,5?

В 1мм 3 крови содержится 6млн. эритроцитов. Сколько всего их в циркулирующей крови, если 20% всей крови находится в кровяном депо? Вес тела принять за 80кг.

В результате переливания несовместимой группы крови произойдет склеивание эритроцитов, что в дальнейшем приведет к гемолизу. Назовите вид гемолиза?

Почему женщинам запрещено работать на производстве с высоким уровнем вибрации, водить большегрузные машины и т.д.?

В чём причина увеличения билирубина в крови при отравлении уксусной кислотой?

Кровь отца резус-положительная, матери резус-отрицательная, первая беременность. Существует ли опасность резус-конфликта матери и плода, если плод имеет резус-положительную кровь?

Отец имеет резус-отрицательную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между плодом и матерью?

Почему при остром психическом стрессе может произойти инфаркт миокарда?

Свёртывание крови представляет собой сложный многокомпонентный «каскадный» ферментативный процесс. Нормальное протекание каждой предшествующей фазы обеспечивает развитие и завершение каждой последующей. Что происходит в первую, вторую и третью фазы коагуляционного гемостаза? Что включает послефаза гемокоагуляции?

Для нормального протекания свёртывания крови необходим ряд факторов: протромбин, тромбопластин, АС – глобулин, ионизированный кальций, проконвертин и др. Назовите фактор, участие которого необходимо для протекания всех фаз гемокоагуляции. Какой фактор обеспечивает превращение растворимого фибрин – полимера в нерастворимый фибрин? Где образуется протромбин? Какие факторы принимают участие в образование плазменной и тканевой протромбиназ?

Определение группы крови

Определение группы крови – процедура, в ходе которой анализируют антигены – белки, входящие в состав эритроцитов, красных кровяных телец. Существует несколько разновидностей антигенов и вырабатываемых ими антител, исходя из чего каждого человека, в зависимости от состава его эритроцитов, можно причислить к определенной группе крови.

Вы можете пройти определение группы крови и резус-фактора в Поликлинике Отрадное. Срок готовности результатов анализа – от одного дня. Если у вас нет времени, чтобы приехать в клинику, сдать кровь для исследования вы можете и на дому: к вам выедет медсестра.

Наличие данных о собственной группе крови в критической ситуации, когда счет идет на минуты, может спасти человеку жизнь. Если такой информации нет, то врачам, перед переливанием крови придется дополнительно тратить время на исследование. Поэтому каждому пациенту рекомендуется сдать анализ на определение группы крови и всегда носить распечатку результатов исследования с собой: например, в кошельке, рядом с другими важными документами.

Определение группы крови и резус-фактора

Сейчас существует более 30 разных подходов к определению групп крови. В зависимости от используемой системы, количество групп крови может быть разным: системы Келл, Кид и Даффи выделяют 3, а MNSs – 9. И все же наиболее распространенными являются две системы:

  1. AB0 (А, Б, ноль);
  2. Резус-фактор.

Система AB0 выделяет 4 группы крови и подразумевает исследование 3 видов антигенов – A, B и H. Однако в результатах анализов H принято заменять на 0 (что говорит об отсутствии в эритроцитах антигенов A и B). Буквы дополняют цифрами – I, II, III или IV. Именно поэтому сами пациенты часто говорят о своей группе крови не в буквенном, а цифровом обозначении – первая, вторая, третья или четвертая. В ходе анализа учитывается не только присутствие/отсутствие в эритроцитах антигенов, но также и наличие в плазме крови агглютининов. Это специфические белки, антитела, атакующие «чужеродные» эритроциты. Если пациенту перелить кровь группы с не подходящими ему антигенами, агглютинины уничтожат содержащие их эритроциты.

По системе AB0 выделяют следующие группы крови:

  • 0 (I) – антигены A и B отсутствуют, выявлены антитела α и β.
  • А (II) – присутствуют антиген А и антитело β.
  • B (III) – в наличии антиген B и антитело α.
  • AB (IV) – выявлены антигены A и B, антител нет.

Система Rh (резус-фактор) подразумевает анализ антигена D – специфического белка крови, присутствующего или отсутствующего на поверхности эритроцитов. Резус-фактор будет положительным (обозначается как Rh+) при наличии антигена. При отсутствии этого белка — он отрицателен (Rh-).

Резус-фактор имеет значение лишь в 2 ситуациях:

  • При переливании крови. Если в организм пациента попадает кровь с иным резус-фактором, способен возникнуть резус-конфликт. Это может привести к гемотрансфузионному шоку – редкому, но серьезному осложнению, которое выражается в значительном ухудшении самочувствия пациента, снижении артериального давления, затруднении дыхания. Иногда происходит нарушение функций сердца, печени или почек, что может стать причиной летального исхода. Резус-отрицательным людям переливают кровь исключительно с отрицательным резусом. Пациентам с положительным резус-фактором при отсутствии альтернативы можно перелить до 500 мл резус-отрицательной крови.
  • При планировании беременности. Если у матери Rh отрицательный, а у отца – положительный, и ребенок унаследовал резус-фактор мужчины, при беременности может развиться резус-конфликт. Организм матери начинает воспринимать плод как «чужеродное тело» и атакует его эритроциты. В итоге ребенок испытывает кислородное голодание, может также произойти самопроизвольный аборт. Врачи способны предотвратить данные последствия и обеспечить нормальное течение беременности и рождение здорового малыша. Но для этого необходимо заранее (желательно еще до зачатия) узнать резус-факторы потенциальных матери и отца. При положительном Rh у матери опасности возникновения резус-конфликта нет, вне зависимости от резус-фактора отца.

Определение группы крови обычно подразумевает применение обеих систем: ABO и Rh.

Показания к исследованию

Анализ на определение группы крови осуществляется:

  • По желанию пациента (если он хочет на всякий случай знать свою группу крови).
  • Перед плановыми операциями, предполагающими кровопотери.
  • Для людей, деятельность которых связана с риском получения тяжелых травм (например, военных, спасателей, пожарных).
  • При планировании беременности – во избежание резус-конфликта.
  • Ежемесячно во время беременности (после 32 недели чаще), если ранее было выяснено, что у женщины отрицательный Rh, а у мужчины – положительный. При выявлении отклонений от нормы будет назначено лечение.
  • Для новорожденного ребенка, если у его матери отрицательный резус-фактор, а у отца положительный, даже если во время беременности не возникало проблем.

При наличии у малыша положительного Rh для профилактики резус-конфликта во время последующей беременности женщине в первые трое суток после родов вводят антирезусный иммуноглобулин.

  • Для новорожденного при наличии признаков гемолитической болезни – состояния, обусловленного несовместимостью Rh матери и ребенка. Симптомами патологии являются желтуха, анемия, отеки. Выявляется гемолитическая болезнь еще во внутриутробный период.

Важно! Резус-конфликт редко возникает при первой беременности, обычно – при последующих. Это объясняется тем, что иммунная система женщины сталкивается с «чужеродным» антигеном впервые, и не успевает дать сильный ответ, но «запоминает угрозу». В следующий раз она уже отреагирует гораздо агрессивнее. Однако определение группы крови и резус-фактора необходимо проводить и перед первой беременностью. Введение антирезусного препарата после первых родов позволит избежать осложнений последующих беременностей.

Экстренно определение группы крови требуется перед переливанием крови в следующих случаях:

  • при тяжелых анемиях;
  • при кровотечениях (маточных, желудочно-кишечных, легочных);
  • при внеплановых хирургических вмешательствах;
  • при серьезных травмах, связанных с потерей большого количества крови.

Подготовка к исследованию

Специфических подготовительных мер не требуется. Однако принимать пищу рекомендуется не позднее чем за 4 часа до забора крови. Также накануне процедуры следует исключить чрезмерные физические нагрузки. Лучше прийти в клинику заблаговременно и до сдачи крови в течение 10-15 минут спокойно посидеть.

Так как на результаты исследования могут оказывать влияние некоторые заболевания, прием ряда лекарств, особенности питания и даже эмоциональное состояние пациента, анализ рекомендуется во избежание получения недостоверных результатов проводить два раза. Следует заранее предоставить врачу список всех принимаемых медикаментов.

Методы определения группы крови

В настоящее время существуют 3 основных метода определения группы крови, соответствующие системе AB0:

  • Определение группы крови стандартными сыворотками.
  • Метод перекрестной реакции.
  • Определение группы крови цоликлонами.

Кровь для исследования обычно берется из вены, иногда из пальца.

Стандартный метод

Определение группы крови по стандартным сывороткам – наиболее простой и распространенный метод. Используемые сыворотки соответствуют 4 группам крови и окрашены в разные цвета:

  • бесцветная – группы 0 (I);
  • синяя (голубая) – группы A (II);
  • красная (розовая) – группы B (III);
  • желтая – группы AB (IV).

Справка. Изогемагглютинирующие сыворотки изготавливают из крови доноров. Они имеют срок годности и должны храниться при температуре 4-8 °С. Сыворотки выпускаются сериями, номер серии отмечают на ампуле. Для анализа берут по две сыворотки каждой группы из разных серий. Это позволяет исключить ошибку в результатах исследования.

Определение группы крови – алгоритм:

  1. На специальную тарелку или стекло наносят капли сывороток
  2. Затем в каждую каплю добавляют кровь пациента.
  3. Тарелку осторожно покачивают, чтобы сыворотки соединились с кровью.
  4. Через 5 минут наблюдают, произошла ли реакция агглютинации («склеивания» эритроцитов): если да, то в пробе образуются зерна или хлопья.
  • При отсутствии реакции агглютинации во всех пробах – группа крови пациента 0 (I).
  • Отсутствие реакции агглютинации в пробе с сывороткой II группы, во всех остальных агглютинация произошла – группа A (II).
  • Отсутствие агглютинации в капле сыворотки III группы – у пациента группа крови B (III).
  • Реакция агглютинации произошла во всех пробах – группа крови AB (IV).

Метод перекрестной реакции

Исследование подразумевает проведение двух анализов: со стандартными сыворотками и со стандартными эритроцитами. Для процедуры с эритроцитами используется сыворотка крови пациента. Ее получают путем центрифугирования биоматериала. Сыворотку подвергают воздействию стандартных эритроцитов.

Справка. Стандартные эритроциты получают из донорской крови групп 0, A и B. Для анализа берется по 2 образца одних и тех же эритроцитов из разных серий.

На тарелку наносят капли сыворотки крови пациента, а рядом с ними – капли стандартных эритроцитов. Тарелку покачивают, чтобы материалы смешались. Затем оценивают результаты:

  • Если агглютинация произошла с эритроцитами групп А и B – группа крови пациента 0.
  • При наличии агглютинации с эритроцитами группы B – группа крови A.
  • Агглютинация с эритроцитами группы А – группа крови B.
  • При отсутствии агглютинации во всех пробах – группа крови AB.

Параллельно с этим исследованием проводят анализ стандартным методом, а затем сравнивают результаты.

Определение группы крови цоликлонами

Определение группы крови с помощью цоликлонов проводится точно так же, как по стандартному методу. Результаты оцениваются тем же образом. Разница лишь в том, что вместо стандартных сывороток применяют цоликлоны анти-А и анти-B – это синтетические сыворотки, содержащие искусственные агглютинины α и β.

Определение резус-фактора

Резус-фактор может определяться с помощью:

  • антирезусной сыворотки (экспресс-метод);
  • цоликлона анти-D супер.

Для исследования с помощью стандартной антирезусной сыворотки могут использовать кровь пациента или эритроциты, полученные из нее. В пробирку капают стандартную антирезусную сыворотку, затем вводят каплю крови пациента или эритроциты. Пробирку вращают в руках, чтобы кровь смешалась с сывороткой. В пробирку также добавляют немного физраствора. Результаты оцениваются по наличию/отсутствию агглютинации:

  • Присутствует – резус положительный.
  • Отсутствует – резус отрицательный.

Анализ с помощью цоликлона анти-D супер проводится на тарелке. На нее наносят реагент, рядом располагают каплю крови. Тарелку покачивают, чтобы материалы соединились. Затем, как и в предыдущем методе, оценивают наличие или отсутствие реакции агглютинации.

Резус-фактор: отрицательный и положительный

Около 85% всех жителей планеты обладают положительным резус-фактором. Наличие или отсутствие антигена D не сказывается на самочувствии и здоровье пациента.

Правила расшифровки результатов

Результаты анализа выдаются пациенту в следующей форме:

  • группа крови (0, А, В, АВ);
  • резус-фактор: Rh+ (положительный) или Rh- (отрицательный).

Результаты анализа на определение группы крови будут актуальными на протяжении всей жизни. Если исследование уже было проведено, повторять его заново не требуется. Группа крови – «постоянная величина» и генетически наследуемый признак, то есть не изменяется в течение жизни. Хотя однажды у юной австралийки Деми Ли-Бреннан поменялась группа крови после пересадки печени. Но данный случай является исключением, и доктора так и не смогли однозначно объяснить этот феномен.

Иногда некоторые пациенты утверждают, что вследствие какого-то заболевания или во время беременности у них изменилась группа крови. Это можно объяснить врачебной ошибкой. И беременность, и некоторые патологии способны затруднять расшифровку результатов анализов, вследствие чего они могут получиться недостоверными. Бывают случаи, что ошибка была допущена при предыдущем исследовании крови.

Плазменные антигены

Плазменные (сывороточные) антигены представляют собой определенные комплексы аминокислот или углеводов на поверх­ности молекул белков плазмы (сыворотки) крови.

ПОНЯТИЕ О ГРУППЕ КРОВИ

ГРУППА КРОВИ — это сочетание нормальных иммунологических и генетических признаков крови, кото­рое наследственно детерминировано и является биоло­гическим свойством каждого индивидуума.

Группы крови передаются по наследству, формируются на 3-4 меся­це внутриутробного развития и остаются неизменными в течение всей жизни. Считается, что у человека группа крови включает несколько де­сятков антигенов в различных сочетаниях. Этих сочетаний — групп крови — реально может быть несколько миллиардов. Практически они оди­наковы лишь у однояйцевых близнецов, имеющих один и тот же генотип.

В практической медицине термин «группа крови», как правило, отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВО и резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке крови.

Для каждого известного антигена обнаружены одно­именные антитела (анти-А, анти-В, анти-резус, анти-Келл и т. д.). Груп­повые антитела крови — не такое постоянное свойство организма челове­ка, как антигены. Лишь в групповой системе АВО антитела являются нормальным врожденным свойством плазмы крови. Эти антитела (агглю­тинины а и b) постоянно присутствуют в плазме крови человека.

Определение группы крови по системе аво

1. Группы крови по системе аво

Под термином «совместимость» понимают сочетание крови донора и реципиента по антигенам и антителам, не вызывающее иммунологи-ческих взаимодействий.

В зависимости от наличия в эритроцитах агглютиногенов А и В, а в сыворотке соответствующих им агглютининов а и b, все люди разделены на четыре группы:

• Группа О (I) — в эритроцитах агглютиногенов нет, в сыворотке агглютинины а и b.

• Группа А (II) — в эритроцитах агглютиноген А, в сыворотке агг­лютинин b.

• Группа В (III) — в эритроцитах агглютиноген В, в сыворотке агг­лютинин а.

• Группа АВ (IV) — в эритроцитах агглютиногены А и В, агглюти­нинов в сыворотке нет.

Антиген А не является однородным, существует два основных его подтипа: В соответствии с этим группа А (II) имеет две подгруппы А(П) и А2 (II), а группа АВ (IV) — АВ (IV) и А2В (IV).

Групповой антиген В отличается большей однородностью, хотя описаны редкие его варианты. Однако существенного кли­нического значения это не имеет.

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО оп­ределяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время ис­пользуют три способа определения групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандар­тным эритроцитам (перекрестный способ),

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и аити-В).

При плановом исследовании врач стационара определяет группу кро­ви по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборато­рия подтвердила данные, полученные врачом стационара. Если резуль­таты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно повторить.

В экстренном поряд­ке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач ста­ционара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка произво­дится, но постфактум).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ

Наиболее распространен в клиничес­кой и лабораторной практике.

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сы­вороток. Проводят в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25°С.

а) Необходимое оснащение

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различ­ных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) — бесцвет­ная (серая), А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — ярко-желтая. Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлеж­ность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

• Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые дру­гие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(П), В(Ш), AB(IV).

• Изотонический раствор хлорида натрия.

• Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

б) Техника проведения реакции

1. На тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютииирующие сыворот­ки I, II, Ш групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп. Всего получается 6 капель.

2. Шесть ка­пель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят су­хой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови дол­жно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки), потом их осторожно с по­мощью стеклянных палочек с закругленными краями перемеши­вают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд.

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают ре­зультат реакции.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.

Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена — А и В и принадлежит к группе AB(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической ре­акции агглютинации (холодовая агглютинация, пангглютинация, аллергия) необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), A(II) и B(III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого под­типа антигена А, реакция агглютинации с гемагглютинирующими сы­воротками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте). Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение допол­нительной реакции с так называемым анти-А, реактивом.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ (ПЕРЕКРЕСТНЫЙ СПОСОБ)

Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в иссле­дуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изо-гемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител а и b с по­мощью стандартных эритроцитов.

• Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отлича­ется тем, что для реакции агглютинации необходимы стандарт­ные эритроциты трех групп крови: 0(1), А(II), В(III).

• Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с за­ранее известной группой крови, хранят при 4-8°С.

На маркированную тарелку пипеткой в шесть ячеек наносят по од­ной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними — по одной маленькой капле (0,01мл) стан­дартных эритроцитов групп 0(1), А(П), В(Ш) (по две серии).

Особенностью трактовки результатов реакции со стандартными эрит­роцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольны­ми (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специ­фическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

Для определения группы крови используются моноклональные анти­тела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.

Гибридома — это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, син­тезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома при­обретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезиро­вать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

Разработаны стандартные реагенты — моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определе­ния агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя лиофилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цве­та, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной боль­шой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакци­ей агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

В 1940 г. К. Ландштейнер и А. С. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими ре­зус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а 15% лиц этого фактора не содержат. Так он назван, по имени макаки Резус, у которой он всегда имеется.

Антигены резус относят к липопротеидам. Они являются очень актив­ными и способны вызывать образование иммунных антител.

Наличие резус-антигена выявляется у человеческого плода начиная с 5-8 недели и хорошо выражено у 3-4-месячного эмбриона.

Определение основных групп крови (А, В, О) и резус – принадлежности

Комплексное исследование, позволяющее оценить принадлежность крови пациента к одной из групп по системе ABO и определить наличие/отсутствие Rh-антигена.

Для чего используется этот анализ?

  • Для определения принадлежности группы крови человека к одной из групп по системе АВО и системе резус.

Когда назначается анализ?

  • При переливании компонентов крови реципиенту;
  • при сдаче крови донором;
  • при подготовке к хирургическим операциям;
  • при планировании беременности или во время нее;
  • при подозрении на фетальный эритробластоз;
  • при подготовке к трансплантации костного мозга, почки, печени и других органов и тканей;
  • при поступлении лиц на военную службу, в ряды МЧС и другие силовые структуры.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до анализа.

Общая информация об исследовании

Каждый человек обладает уникальным сочетанием антигенов на поверхности своих клеток, в том числе и эритроцитов. На сегодняшний день известно более 250 антигенов эритроцитов, образующих около 30 антигенных систем. В клиническом плане наиболее важными из них являются система АВО и система резус.

Система АВO – основная система совместимости крови. Она представлена агглютиногенами A и B, являющимися гликопротеинами и расположенными на поверхности эритроцитов, и агглютининами альфа и бета, относящимися к классу иммуноглобулинов IgM и циркулирующих в плазме крови. В зависимости от комбинации этих агглютиногенов и агглютининов, выделяют 4 группы крови по системе АВО.

Первая (I) группа крови (самая распространенная в европейской популяции, 42 % населения) также называется O-группа, при ней на поверхности эритроцитов агглютиногены A или B отсутствуют, в плазме выявляются агглютинины альфа и бета.

Вторая (II) группа крови (37 %) также называется A-группа, на поверхности эритроцитов присутствует агглютиноген A, в плазме выявляется агглютинин бета.

Третья (III) группа крови (13 % населения) также называется B-группа крови, на поверхности эритроцитов присутствует агглютиноген B, в плазме выявляется агглютинин альфа.

Четвертая (IV) группа крови (самая редкая, всего 8 % населения) также называется AB-группа крови, на поверхности эритроцитов присутствуют агглютиногены обоих типов A и B, в плазме агглютинины альфа и бета отсутствуют.

Система резус также состоит из нескольких антигенов, главный из которых называется антиген D, или резус-фактор. Примерно у 85 % людей на поверхности эритроцитов можно выявить резус-фактор (резус-положительная кровь).

Принадлежность крови человека к определенной группе по системе АВО и системе резус является генетически обусловленной и не меняется в течение всей жизни.

Для чего используется исследование?

  • Для определения принадлежности группы крови человека к одной из групп по системе АВО и системе резус.

Что означают результаты?

Результаты определения группы крови по системе АВО
Агглютиногены на поверхности эритроцитовАгглютинины в сыворотке кровиГруппа крови, обозначение римскими цифрамиГруппа крови, обозначение латинскими буквами
Отсутствуютальфа и бетаIO
AбетаIIA
ВальфаIIIB
ABОтсутствуютIVAB

Результаты определения резус-фактора
Резус-фактор на поверхности эритроцитов
НайденРезус-положительная кровь, Rh+
Не найденРезус-отрицательная кровь, Rh-

Что может влиять на результат?

  • Наличие в сыворотке больного специфических белков (М-протеина, холодовых антител) или некоторых бактерий может препятствовать реакции агглютинации, используемой в тесте.
  • Прием некоторых лекарственных средств (леводопы, метилдопы) может приводить к получению ложноположительных результатов анализа резус-фактора.

Определение группы крови по системе АВО – важность процедуры и особенность методики

Группа крови (фенотип) наследуется по законам генетики и определяется набором генов (генотипом), получаемых с материнской и отцовской хромосомой. Человек может иметь только те антигены крови, которые имеются у его родителей. Наследование групп крови по системе АВО определяется тремя генами — А, В и О. В каждой хромосоме может быть только один ген, поэтому ребенок получает от родителей только два гена (один от матери, другой от отца), которые и вызывают появление в эритроцитах двух антигенов системы АВО. На рис. 2 представлена схема наследования групп крови по системе АВО.

Антигены крови появляются на 2—3-м месяце внутриутробной жизни и к рождению ребенка хорошо определяются. Естественные антитела выявляются с 3-го месяца после рождения и к 5—10 годам достигают максимального титра.

Схема наследования групп крови по системе АВО

Определение групп крови

В настоящее время существует два метода определения группы крови.
Простой — определение антигенов крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и цоликлонам анти — А и анти — В. Цоликлоны, в отличие от стандартных сывороток, не являются продуктами клеток человека, поэтому исключена контаминация препаратов вирусами гепатита и ВИЧ (вирус иммунодефицита человека). Второй метод — перекрестный, заключающийся в определении агтлютиногенов одним из указанных способов с дополнительным определением агглютининов с помощью стандартных эритроцитов.

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Для определения групп крови применяют стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. В сыворотке имеются агглютинины, являющиеся антителами всех 4 групп крови, а их активность определяется титром.

Титрование естественных антител а и бета на тарелках

Техника получения сывороток и определения титра заключается в следующем. Для их заготовки используют донорскую кровь. После отстаивания крови, сливания и дефибриллирования плазмы необходимо определить титр (разведение), т. е. активность изогемагглютинирующих сывороток. С этой целью берется ряд центрифужных пробирок, в которых разводится сыворотка. Вначале в чистые пробирки добавляется по 1 мл физиологического раствора поваренной соли. В 1-ю пробирку с физиологическим раствором добавляют 1 мл испытуемой сыворотки, жидкости смешиваются, соотношение жидкостей в 1-й пробирке 1:1. Далее 1 мл смеси из 1-й пробирки переносится во 2-ю, все это смешивается, получается соотношение 1:2. Затем 1 мл жидкости из 2-й пробирки переносится в 3-ю пробирку, смешивается, получается соотношение 1:4. Таким образом разведение сыворотки продолжают до 1:256.

На следующем этапе производят определение титра разведенной сыворотки. Из каждой пробирки на плоскость наносят по 2 крупные капли. В каждую каплю добавляют заведомо иногруппные эритроциты (в соотношении 1 к 10), смешивают, ждут 3—5 минут. Далее определяют последнюю каплю, где произошла агглютинация. Это наибольшее разведение и является титром гемагтлютинирующей сыворотки. Титр не должен быть ниже чем 1:32. Хранение стандартных сывороток допускается в течение 3 месяцев при температуре от +4° до +6 °С с периодическим контролем через 3 недели.

Методика определения групп крови.

На тарелку или любую белую пластину со смачиваемой поверхностью необходимо нанести цифровое обозначение группы сыворотки и ее серологическую формулу в следующем порядке слева направо: I II, III. Это потребуется для определения исследуемой группы крови.

Стандартные сыворотки системы АВО каждой группы двух различных серий наносят на специальную планшетку или тарелку под соответствующими обозначениями, чтобы получилось два ряда по две большие капли (0,1 мл). Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) рядом с каждой каплей сыворотки и перемешивают кровь с сывороткой (соотношение сыворотки и крови 1 к 10). Реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) и отрицательной (отсутствие агглютинации). Результат оценивается в зависимости от реакции со стандартными сыворотками I, II, III. Оценивают результат через 3—5 минут. Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови по двум сериям стандартных сывороток.

Ссылка на основную публикацию