Норма лимфоцитов в крови у ребенка — как она меняется с возрастом?

Лимфоциты в крови

  • Лимфоциты – что это, какие они бывают
  • Показания для проведения анализа
  • Подготовка к анализу
  • Метод исследования
  • Нормы
  • Лимфоциты повышены
  • Лимфоциты понижены
  • Лимфоцитоз у детей

Лимфоциты – что это, какие они бывают

Лимфоциты – это один из компонентов белых кровяных телец, для их обнаружения используют общий анализ крови на лимфоциты. Они играют важную роль в формировании иммунных реакций. Их функция состоит в распознавании возбудителей болезней и мутировавших собственных клеток. После идентификации чужеродного объекта лимфоциты уничтожают его тем или иным путем: фагоцитоз, выработка специальных антигенов. Для уничтожения собственных клеток, переродившихся в раковые либо подвергшиеся другим изменениям лимфоциты подают особый химический сигнал, который заставляет такую клетку запустить процесс самоуничтожения. Помимо общего анализа крови на лимфоциты, в медицинском центре МедАрт проводят биохимический анализ крови.

Существует три разновидности этих клеток:

  1. Т-лимфоциты. Они созревают в тимусе. Играют важную роль в борьбе с инородными телами, инфекциями. Часть Т-лимфоцитов выполняет регуляторные функции, отвечает за длительность и силу иммунной реакции. Именно эти клетки поражаются при заражении ВИЧ.
  2. В-лимфоциты. Их основная задача – выработка антител против вирусов, других возбудителей инфекции. Кроме того, они способны сохранять информацию о перенесенных заболеваниях создавая тем самым постоянный иммунитет.
  3. NK – клетки. Их главная функция – обнаружение и устранение клеток организма переродившихся в злокачественные.

Образуются лимфоциты в красном костном мозге, их молодые, незрелые формы называются лимфобластами. Созревание идет в несколько стадий, происходит не только в костном мозге, но и в лимфоидных узлах, других органах лимфатической системы.

Появление повышенного количества лимфоцитов может служить маркером патологий костного мозга, развития опухолевых процессов в нем. Увеличение уровня лимфобластов также фиксируется при длительных инфекционных процессах. В этом случае это служит признаком истощения защитных сил организма. Иммунная система не успевает подготовить достаточное количество лимфоцитов к борьбе с возбудителем, это и становится причиной появления в крови большого количества лимфобластов.

Показания для проведения анализа

Общий анализ крови на лимфоциты назначают если есть подозрение на повышение либо уменьшение их количества. Анализ может назначаться по другим причинам, он позволяет получить много ценных данных о состоянии крови и всего организма. К основным показаниям относятся:

  • Выявление реакции иммунитета на присутствие патогенных микроорганизмов.
  • Состояние иммунитета человека.
  • Физический и химический состав крови.
  • Профилактический анализ – для обнаружения скрытых изменений в формуле крови, которые не проявляют себя конкретными симптомами.

Подготовка к анализу

Анализ на лимфоциты входит в общий анализ крови, правила их проведения совпадают. То есть особой подготовки такое обследование не требует. Есть всего два условия которые нужно соблюдать:

  • Кровь берется в утренние часы.
  • За 8-12 часов до забора крови нужно воздержаться от пищи.

Также не следует курить за 2-3 часа до проведения процедуры. Компоненты табачного дыма могут вызывать серьезные временные изменения в уровне белых кровяных клеток. Стоит избегать употребления алкоголя за 2-3 дня до взятия анализа так как алкоголь также может повлиять на достоверность полученных результатов.

Если не соблюсти эти требования, возможно ухудшение точности исследования, что приведет к получению врачом недостоверной информации и возможным ошибкам в диагностике либо повторному назначению обследования.

Метод исследования

Забор материала для анализа на лимфоциты осуществляется из вены при помощи обычного шприца либо специальной вакуумной системы. Традиционная техника взятия анализа при помощи обычного шприца на данный момент устарела и может приводить к следующим сложностям:

  • Свертывание крови в игле.
  • Разрушение части клеток крови.
  • Длительное время проведения манипуляции.
  • Контакт крови с окружающей средой
  • Сложность с соблюдением правильного соотношения крови и реагентов.Кроме того, традиционная техника не исключает контакта медперсонала с биоматериалом пациента, что может представлять опасность для здоровья. Поэтому во многих клиниках для забора крови применяют современные вакуумные контейнеры.

Кровь в него поступает за счет вакуума в пробирке, все параметры вакутейнера подбираются на этапе производства с целью сократить время для забора крови и обеспечить правильное соотношение количества реагента и крови.

Преимущества вакуумных систем:

  • Стандартизированный процесс забора крови, занимающий минимальное время.
  • Полностью исключен контакт медперсонала с кровью пациента.
  • Простая маркировка и идентификация проб, что исключает путаницу с пробирками.
  • Почти безболезненное проведение процедуры.

Взять кровь для общего анализа можно из пальца, но в настоящий момент эта процедура используется значительно реже.

Нормы

Нормальный уровень лимфоцитов в крови зависит от возраста пациента. У детей количество лимфоцитов выше, со временем этот показатель постепенно снижается. На количество этих клеток влияет пол пациента, у женщин показатель относительно выше. Это связано с большей активностью и адаптивной способностью лимфатической системы женского организма.

Возраст человекаАбсолютный содержаниеСоотношение в %
У ребёнка младше года2-1245-71
У годовалого ребенка4-1038-61
2-4 года3-934-50
4-10 лет1,6-6,731-51
10-18 лет1,3-5,331-43
Старже 18 лет, взрослые люди1-4,920-40
Онкориск женский:265368

Лимфоциты повышены

Причиной того, что лимфоциты повышены часто выступают разнообразные вирусные инфекции. Такое повышение называется лимфоцитозом, чаще всего его регистрируют при заболеваниях, вызванных вирусами:

  • Эпштейн-Барр.
  • Аденовирус.
  • Герпес.
  • Детские инфекции (краснуха, корь, паротит).

Количество лимфоцитов может расти при некоторых бактериальных инфекциях, например, сифилисе, коклюше или туберкулезе. К лимфоцитозу могут приводить заболевания, вызванные простейшими, например, малярия и токсоплазмоз. Нередко повышение лимфоцитов вызвано глистными инвазиями.

Лимфоциты могут быть повышаться по причинам, не связанным с инфекциями. К ним относятся:

  1. Реакции гиперчувствительности.
  2. Стрессовый лимфоцитоз.
  3. Аутоиммунные заболевания.
  4. Нарушения эндокринных органов, особенно щитовидной железы.
  5. Развитии опухолей и предопухолевых процессов.

К наиболее ярким признакам повышения числа лимфоцитов относятся:

  • Увеличенные печени, селезенки и лимфатических узлов.
  • Общее недомогание, проявления инфекций органов дыхания, покраснения и отек слизистых оболочек.
  • Резкое повышение либо снижение температуры, сопровождающееся ознобом.
  • Диспепсические явления – рвота, нарушения стула, тошнота.
  • Расстройства нервной системы на фоне повышенной температуры.

Нужно учитывать, что лимфоцитоз не всегда проявляется через выраженные симптомы. Зачастую повышения уровня этих клеток обнаруживается случайно. Точно определить причину по которой произошло изменение формулы крови сможет только врач, для этого часто требуется проведение дополнительных тестов.

Чтобы устранить лимфоцитоз, нужно вылечить заболевание, которое привело к повышенной реакции иммунитета. Важно понимать, что кроветворная система отвечает на выздоровление с определенной задержкой. Даже после полного излечения лимфоцитоз может сохраняться до нескольких месяцев.

Лимфоциты понижены

Понижение лимфоцитов называется лимфопенией. Такое состояние характерно для следующих заболеваний:

  • СПИД.
  • Длительные, тяжело протекающие инфекции.
  • Патологии костного мозга.
  • Опухоли лимфатических тканей.
  • Облучение радиацией.
  • Прием некоторых групп препаратов, таких как цитостатики.
  • Беременность.

В большинстве случаев снижение уровня лимфоцитов свидетельствует об истощении иммунной системы, когда организм по различным причинам не в состоянии поддерживать нужный уровень этих клеток в крови.

Лимфопения редко проявляется характерными симптомами. К наиболее частым признакам этого состояния относятся:

  • Уменьшение либо полное отсутствие миндали и других периферических лимфоузлов.
  • Заболевания кожи – экзема, пиодермия.
  • Общие признаки болезней крови – язвы слизистой оболочки рта, петехии, бледность, желтуха.
  • Увеличение печени и селезенки.

Как и в случае с лимфоцитозом, для нормализации уровня этих клеток нужно устранить причину, которая привела к патологическому состоянию. Нужно обратиться к врачу, который сможет установить точный диагноз и назначить правильную схему лечения.

В случае лимфопении беременных, при умеренном снижении уровня лимфоцитов особых мер принимать нет необходимости. Достаточно усиленного контроля за состоянием здоровья и регулярного прохождения всех нужных обследований. Если произошло резкое падение лимфоцитов – стоит обратиться за медицинской помощью для дополнительной диагностики.

Лимфоцитоз у детей

Особенностью детского возраста являются достаточно значительные изменения в формуле крови. Выделяют два так называемых перекреста, когда происходят резкие изменения соотношения клеток крови. Первый происходит в возрасте около недели после рождения, когда количество лимфоцитов начинает превышать количество остальных клеток крови. Второй перекрест происходит в 5-6 лет, когда количество лейкоцитов начинает преобладать над лимфоцитами.

Эти явления носят физиологический характер и являются проявлениями нормального развития иммунной, кроветворной систем. Но встречаются и патологические лимфоцитозы, которые свидетельствуют о развитии разнообразных болезней (в основном инфекционной природы).

Основной причиной повышения лимфоцитов в детском организме выше нормы являются инфекционные болезни, вызываемые различными вирусами. Чаще всего это заболевания, характерные для детского возраста – корь, краснуха, простудные инфекции. Может расти уровень лимфоцитов и по другим причинам:

  • Аллергические реакции.
  • Авитаминоз, систематическое недоедание.
  • Бронхиальная астма.
  • Отравления химическими веществами.

Несмотря на то, что повышение лимфоцитов в детском организме далеко не всегда сопровождается характерными симптомами, существует ряд признаков свидетельствующих об этом. К ним относятся:

  • Повышение температуры тела.
  • Сыпь.
  • Увеличение миндалин и других региональных лимфоузлов.
  • Нарушения пищеварения.
  • Симптомы общего недомогания – слабость, быстрая утомляемость.

При проявлении таких симптомов нужно обратиться к педиатру и пройти рекомендуемые обследования. После постановки диагноза врач назначит соответствующее лечение, которое устранит причину активизации иммунной системы.

Нужно учитывать, что нормальный уровень лимфоцитов восстанавливается с запозданием. Даже после полного восстановления после инфекции либо других заболеваний пройдет от нескольких недель до 1-2 месяцев до нормализации уровня белых кровяных клеток. Это физиологический процесс, который не требует дополнительного лечения и не должен вызывать беспокойства.

Лейкоциты в крови: норма по возрасту, причины повышенных и пониженных значений

Лейкоциты – важнейший элемент крови и основа иммунитета организма. Наша кровь красного цвета, благодаря эритроцитам – красным кровяным тельцам. На каждую тысячу эритроцитов приходится в среднем всего один лейкоцит. Однако, несмотря на небольшое процентное соотношение, эти клетки играют важную роль в здоровье человека. Они различны по функциям, форме, внешнему виду. Их главная задача – защищать организм от нападающих на него вирусов, бактерий, грибков и прочих «вредителей», бороться с повреждениями ткани и уничтожать собственные состарившиеся или мутировавшие клетки. Они фундамент защитных сил организма.

Несмотря на то, что лейкоциты определяются в основном в крови, вырабатывает их особый орган – костный мозг. Соответственно, они образуются в ответ на любое повреждение тканей. Это элемент здоровой, естественной воспалительной реакции.

Виды лейкоцитов

Под микроскопом можно разглядеть несколько десятков разных форм лейкоцитов – разной стадии созревания, или «возраста». Выделяют 5 основных групп зрелых клеток.

Базофилы – наименьшая по численности группа лейкоцитов. Они регулируют кровоток в небольших сосудах, помогают другим белым кровяным тельцам передвигаться в тканях, воздействуют на рост новых капилляров. Базофилы контролируют возникновение аллергических реакций, подавляют аллергены, регулируют свертываемость крови, нейтрализуют токсины и яды. Когда аллерген контактирует с базофилом, эта клетка выбрасывает множество биоактивных веществ, ответственных за развитие аллергических реакций.

Эозинофилы – вместе с базофилами они являются маркерами гуперчувствительной реакции в организме. Они тоже участвуют в аллергических механизмах, но другим образом. В отличие от базофилов, которые вызывают аллергическую реакцию, эозинофилы, наоборот, борются с ней, связывая чужеродные частицы. Обладают противопаразитарной и бактерицидной активностью, отвечают за борьбу с многоклеточными паразитами – гельминтами. Их процент в крови в норме – около 1-4%. Повышение содержания, прежде всего, может свидетельствовать о выраженных аллергических состояниях, гельминтозах, ревматологических заболеваниях, реже – онкологической патологии.

Нейтрофилы – отряд быстрого реагирования и наиболее многочисленная группа лейкоцитов (до 80% от общего числа). Как только чужеродное вещество (например – заноза, бактерия, или вирус) попадает в организм, нейтрофилы тут же к нему перемещаются, чтобы уничтожить. Они выбрасывают в сторону инородного интервента множество активных ферментов и буквально расщепляют и переваривают любое, не относящееся к организму, вещество – этот процесс называется фагоцитозом. Увы, победив в нескольких таких боях, нейтрофилы и сами погибают.

Моноциты – вид крупных клеток. Они также осуществляют фагоцитоз – «съедают» бактерии и микробы, проникающие в организм, очищают кровь от погибших лейкоцитов и вырабатывают интерферон. Умеют передавать информацию лимфоцитам о том, с каким микробом столкнулись.

Лимфоциты – главные в осуществлении клеточного и гуморального иммунитета. Они выделяют защитные антитела и координируют работу всех остальных видов белых телец.

Как мы видим, лейкоциты – настоящая армия иммунной системы, стоящая на страже нашего здоровья. Без их корректной работы человек беззащитен перед вирусами, бактериями и грибками.

Анализ на лейкоциты в крови

Для определения уровня лейкоцитов используется классический общий анализ крови – самое востребованное исследование, без которого не обходится ни одно обследование.

Помимо определения пяти видов белых телец, анализ выявляет количество и характеристики эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов и других компонентов крови.

Также он необходим при диагностике анемий, диагностике и лечении воспалительных процессов, в качестве элемента профилактического обследования, при диагностике разнообразного спектра заболеваний и для мониторинга за лечением.

Норма лейкоцитов в крови

Говоря о норме практически любого лабораторного анализа, нужно знать, что лаборатории могут работать на разных установках, применять различные методы проведения анализа и отличающиеся реагенты. Поэтому, в зависимости от лаборатории, могут незначительно различаться референсные значения – границы нормы.

В норме лейкоциты в крови у взрослых мужчин и женщин содержатся в количестве 4-9×10 Ед/л.

Содержание лейкоцитов в крови у ребенка в норме выше, чему взрослого. Например, у новорожденных этот показатель достигает 9,2-13,8х10 Ед/л. С взрослением ребенка уровень белых клеток в норме снижается. В возрасте трех лет нормальный диапазон составляет 6-17х10 Ед/л, а к десяти годам – уже 6,1-11,4 х10 Ед/л.

У беременных женщин уровень лейкоцитов тоже часто выше, чем у обычных взрослых людей. К концу третьего семестра повышенное содержание белых клеток у них считается нормой. Это объясняется возросшей нагрузкой на организм.

У пожилых людей производство лейкоцитов может снижаться на 2-3%, а их активность и защитные функции сокращаются почти в два раза. Это одна из причин, почему у людей в возрасте ослаблен иммунитет.

Отклонение уровня лейкоцитов в ту или иную сторону от нормы свидетельствует о проблемах со здоровьем. При этом важно знать не только показатель белых телец в крови пациента в общем (суммарное количество), но и каждого вида этих клеток по отдельности.

Лейкоцитарная формула у здорового взрослого человека выглядит следующим образом:

  • нейтрофилы: палочкоядерные – 1-5%, сегментоядерные – 40-70%;
  • лимфоциты – 20-45%;
  • моноциты – 3-8%;
  • эозинофилы – 1-5%;
  • базофилы – 0-1%.

Повышенные лейкоциты в крови

Лейкоцитоз возникает как следствие патологических процессов. При вторжении в организм агрессоров он выбрасывает в кровь большое количество белых клеток для борьбы с угрозой.

Лейкоцитоз может наблюдаться при следующих патологических процессах:

  • инфекционных заболеваниях любой природы (в том числе – при заражении вирусами и при гнойных инфекциях);
  • на фоне хронических воспалительных процессов;
  • при некоторых онкологических заболеваниях;
  • при аллергических реакциях;
  • при наличии паразитов в организме;
  • в ситуациях, когда нарушен защитный барьер кожи (при масштабных ожогах и обморожениях).

Есть ряд состояний, не связанных с заболеваниями, но при которых тоже повышается уровень лейкоцитов в крови. Речь идет про сильные стрессы, курение и строгие диеты. Также существует несколько физиологических состояний, естественным образом вызывающих повышенные показатели. Как мы рассказали выше, у беременных лейкоциты повышаются ближе к родам. Показатель повышается сразу после еды и приходит в норму через несколько часов – поэтому важно сдавать кровь минимум через 5 часов после приема пищи.

Баня или сауна и активная физическая нагрузка перед анализом тоже могут поднять уровень лейкоцитов.

Чтобы получить достоверный результат, общий анализ крови необходимо сдавать строго в спокойном состоянии натощак.

Пониженные лейкоциты в крови

Состояние, характеризующееся пониженным уровнем белых телец в крови, называется лейкопения. Довольно часто она носит временный характер, однако если показатель стабильно низок, это может свидетельствовать о серьезных патологиях.

Пониженный уровень лейкоцитов в крови может быть связан со следующими причинами:

  • поражениями костного мозга (например – радиоактивным излучением), при которых он не в состоянии производить необходимое количество белых клеток;
  • нарушениями в циркуляции крови;
  • слишком быстрым распадом лейкоцитов;
  • последствиями химиотерапии;
  • аутоиммунными и редкими наследственными заболеваниями;
  • приемом некоторых препаратов;
  • строгими диетами.

Чтобы восстановить нормальное значение лейкоцитов, необходимо обнаружить первичную причину патологии.

Оценка показателей клеточного иммунитета

Первым исследованием всегда является подсчет лейкоцитарной формулы (см. главу «Гематологические исследования»). Оцениваются как относительные, так и абсолютные значения количества клеток периферической крови.

Определение основных популяций (Т-клетки, В-клетки, натуральные киллеры) и субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-ЦТЛ). Для первичного исследования иммунного статуса и выявления выраженных нарушений иммунной системы ВОЗ рекомендовано определение CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, соотношение CD4/CD8. Исследование позволяет определить относительное и абсолютное количество основных популяций лимфоцитов: Т-клетки – CD3, В-клетки – CD19, натуральные киллеры (NK) – CD3- CD16++56+, субпопуляции Т лимфоцитов (Т-хелперы CD3+ CD4+, Т-цитотоксические CD3+ CD8+ и их соотношение).

Метод исследования

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводится c использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным ангинам на клетках иммунной системы, методом проточной лазерной цитофлуорометрии на проточных цитофлуориметрах.

Выбор зоны анализа лимфоцитов производится по дополнительному маркеру CD45, который представлен на поверхности всех лейкоцитов.

Условия взятия и хранения образцов

Венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром, строго натощак, в вакуумную систему до указанной на пробирке метки. В качестве антикоагулянта используется К2ЭДТА. После взятия пробирку с образцом медленно переворачивают 8-10 раз для перемешивония крови с антикоагулянтом. Хранение и транспортировка строго при 18–23°С в вертикальном положении не более 24 ч.

Невыполнение этих условий приводит к некорректным результатам.

Интерпретация результатов

Т-лимфоциты (CD3+ клетки). Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вырусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, а именно о недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии, злокачественных новообразованиях, после травмы, операций, инфаркта, при курении, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

В-лимфоциты (CD19+ клетки) Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, при новообразованиях иммунной системы, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

Увеличение отмечается при аутоиммунных заболеваниях, хронических заболеваниях печени, циррозе, муковисцедозе, бронхиальной астме, паразитарных и грибковых инфекциях. Характерно в период реконвалесценции после перенесенных острых и хронических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженное увеличение наблюдается при хроническом В-лимфолейкозе.

NK-лимфоциты с фенотипом CD3-CD16++56+ Натуральные киллеры (NK-клетки) – популяция больших гранулярных лимфоцитов. Они способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах, паразитарных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортикостероидами, стрессе, дефиците цинка.

Т-лимфоциты хелперы с фенотипом CD3+CD4+ Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD3+ CD8+ Повышение выявляется практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции. Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях.

Соотношение CD4+/CD8+ Исследование соотношения CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) рекомендовано только для мониторинга ВИЧ-инфекции и контроля эффективности АРВ терапии. Позволяет определить абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов, субпопуляций Т-хелперов, ЦТЛ и их соотношение.

Диапазон значений – 1,2–2,6. Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях. Является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях, остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Изменение соотношения может быть связано с количеством хелперов и ЦТЛ у данного пациента. Например, снижение количества CD4+ Т-клеток при острой пневмонии в начале заболевания ведет к снижению индекса, а ЦТЛ при этом могут не измениться.

Для дополнительного исследования и выявления изменений иммунной системы при патологиях требующих оценки наличия острого или хронического воспалительного процесса и степени его активности, рекомендуется включать подсчет количества активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и ТNK–клеток с фенотипом CD3+CD16++56+.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+HLA-DR+ Маркер поздней активации, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

ТNK-лимфоциты с фенотипом CD3+CD16++CD56+ Т-лимфоциты, несущие на своей поверхности маркеры CD16++ CD 56+. Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Снижение их в периферической крови может наблюдаться при различных органоспецифических заболеваниях и системных аутоиммунных процессах. Увеличение отмечено при воспалительных заболеваниях разной этиологии, опухолевых процессах.

Исследование ранних и поздних маркеров активации Т-лимфоцитов (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) дополнительно назначают для оценки изменений ИС при острых и хронических заболеваниях, для диагностики, прогноза, мониторинга течения заболевания и проводимой терапии.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+CD25+, рецeптор к ИЛ2 CD25+ – маркер ранней активации. О функциональном состоянии Т-лимфоцитов (CD3+) свидетельствует количество экспрессирующих рецепторов к ИЛ2 (CD25+). При гиперактивных синдромах количество этих клеток возрастает (острые и хронические лимфолейкозы, тимома, отторжение трансплантата), кроме того, повышение их может свидетельствовать о ранней стадии воспалительного процесса. В периферической крови их можно выявить в первые три дня болезни. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах, аутоиммунных процессах, ВИЧ-инфекции, грибковых и бактериальных инфекциях, ионизирующей радиации, старении, отравлении тяжелыми металлами.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD8+CD38+ Присутствие CD38+ на ЦТЛ лимфоцитах отмечено у пациентов с разными заболеваниями. Информативный показатель при ВИЧ-инфекции, ожоговой болезни. Увеличение числа ЦТЛ с фенотипом CD8+CD38+ наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических и некоторых эндокринных заболеваниях. При проведении терапии показатель снижается.

Субпопуляция натуральных киллеров с фенотипом CD3- CD56+ Молекула CD56 – адгезивная молекула, широко представленная в нервной ткани. Кроме натуральных киллеров, экспрессируется на многих типах клеток, в том число на Т-лимфоцитах.

Увеличение данного показателя свидетельствуют о расширении активности специфического клона клеток киллеров, которые имеют меньшую цитолитическую активность, чем NK-клетки с фенотипом CD3- CD16+. Количество этой популяции возрастает при гематологических опухолях (ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, плазмоклеточная миелома, апластическая крупноклеточная лимфома), хронических заболеваниях, некоторых вырусных инфекциях.

Снижение отмечается при первичных иммунодефицитах, вирусных инфекциях, системных хронических заболеваниях, стрессе, лечении цитостатиками и кортикостероидами.

Рецептор CD95+ – один из рецепторов апоптоза. Апоптоз – сложный биологический процесс, необходимый для удаления из организма поврежденных, старых и инфицированных клеток. Рецептор CD95 экспрессируется на всех клетках иммунной системы. Он играет важную роль в контроле функционирования иммунной системы, так как является одним из рецепторов апоптоза. Его экспрессия на клетках определяет готовность клеток к апоптозу.

Снижение доли CD95+-лимфоцитов в крови пациентов свидетельствует о нарушении эффективности последнего этапа выбраковки дефектных и инфицированных собственных клеток, что может привести к рецидиву заболевания, хронизации патологического процесса, развитию аутоиммунных заболеваний и повышению вероятности опухолевой трансформации (к примеру, рака шейки матки при папилломотозной инфекции). Определение экспрессии CD95 имеет прогностическое значение при миело- и лимфопролифератиных заболеваниях.

Повышение интенсивности апоптоза наблюдается при вирусных заболеваниях, септических состояниях, при употреблении наркотических средств.

Активированные лимфоциты CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Тест отражает функциональное состояние Т-лимфоцитов и рекомендован для контроля за течением заболевания и контроля иммунотерапии при воспалительных заболеваниях разной этиологии.

Интерпретация результатов иммунофенотипирования при диагностике лимфопролиферативного заболевания с учетом иммунофенотипического счета Текст научной статьи по специальности « Клиническая медицина»

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Исаева Наталья Васильевна, Зайцева Г. А., Загоскина Т. П.

В работе обращено внимание на иммунофенотипическую гетерогенность хронического лимфолейкоза , выявляемую с помощью базовых диагностических маркеров клетки. На основании анализа иммунофенотипов у 108 больных В-клеточными лимфопролиферативными заболеваниями установлено, что наиболее редко атипичность связана с показателями экспрессии монотипичных иммуноглобулинов и CD5, а наиболее часто с CD23, FMC7, CD22 и CD79b. В настоящем наблюдении у 10% обследованных больных хроническим лимфолейкозом иммунофенотипический счет составил 3 или 2 балла и зарегистрирован атипичный вариант. Показано, что больные хроническим лимфолейкозом со сниженным иммунофенотипическим счетом характеризуются большей выраженностью опухолевого субстрата.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Исаева Наталья Васильевна, Зайцева Г. А., Загоскина Т. П.

THE INTERPRETATION OF RESULTS OF IMMUNE PHENOTYPING DURING DIAGNOSTIC OF LYMPHATIC PROLIFERATIVE DISEASE ACCOUNTING THE IMMUNE PHENOTYPING COUNT

The article considers immune phenotyping heterogeneity of chronic lymphatic leukemia detected using basic diagnostic markers of cell. The results of analysis of immune phenotypes of 108 patients with B-cell lymphatic proliferative diseases made it possible to establish that the atypical is related most rarely to indicators of expression of monotypic immunoglobulines and CD5 and most frequently to CD23, FMC7, CD22 and CS79b. During the present observation, the immune phenotyping count made up “3” or “2”points and the atypical alternative was registered among 10% of all examined patients with chronic lymphatic leukemia . It is demonstrated that patients with chronic lymphatic leukemia and with lower immune phenotyping count are characterized by major intensity of tumor substrate.

Текст научной работы на тему «Интерпретация результатов иммунофенотипирования при диагностике лимфопролиферативного заболевания с учетом иммунофенотипического счета»

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616.155.392.2-036.12-078.33

Н. В. Исаева, Г. А. Зайцева, Т. П. Загоскина

интерпретация результатов иммунофенотипирования при диагностике лимфопролиферативного заболевания с учетом иммунофенотипического счета

ФГУ Кировский НИИ гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства

В работе обращено внимание на иммунофенотипическую гетерогенность хронического лимфолейкоза, выявляемую с помощью базовых диагностических маркеров клетки. На основании анализа иммунофенотипов у 108 больных В-клеточными лимфопролиферативными заболеваниями установлено, что наиболее редко атипичность связана с показателями экспрессии монотипичных иммуноглобулинов и CD5, а наиболее часто – с CD23, FMC7, CD22 и CD79b. В настоящем наблюдении у 10% обследованных больных хроническим лимфолейкозом иммунофенотипический счет составил 3 или 2 балла и зарегистрирован атипичный вариант. Показано, что больные хроническим лимфолейкозом со сниженным иммунофенотипическим счетом характеризуются большей выраженностью опухолевого субстрата.

Ключевые слова: иммунофенотипирование, иммунофенотипический счет, хронический лимфолейкоз

N.V. Isayeva, G.A. Zaytseva, T.P. Zagoskina The interpretation of results of immune phenotyping during diagnostic of lymphatic proliferative disease accounting the immune

THE KIROV RESEARCH INSTITUTE OF HEMATOLOGY AND BLOOD TRANSFUSION OF THE FEDERAL

MEDICAL BIOLOGICAL AGENCY, KIROV The article considers immune phenotyping heterogeneity of chronic lymphatic leukemia detected using basic diagnostic markers of cell. The results of analysis of immune phenotypes of 108 patients with B-cell lymphatic proliferative diseases made it possible to establish that the atypical is related most rarely to indicators of expression of monotypic immunoglobulines and CD5 and most frequently to CD23, FMC7, CD22 and CS79b. During the present observation, the immune phenotyping count made up “3” or “2”points and the atypical alternative was registered among 10% of all examined patients with chronic lymphatic leukemia. It is demonstrated that patients with chronic lymphatic leukemia and with lower immune phenotyping count are characterized by major intensity of tumor substrate.

Key words: immune phenotyping, immune phenotyping count, chronic lymphatic leukemia

При диагностическом иммунофенотипировании с использованием проточной цитометрии образец крови или костного мозга больного с лимфопролиферативным заболеванием (ЛПЗ) проходит следующие этапы: долабораторный, пробо-подготовки, учета исследованных показателей и интерпретации результатов. Долабораторный этап в настоящее время достаточно хорошо освещен [8], но подходы к этапам пробопод-готовки и учету показателей до конца не регламентированы, остаются прерогативой исследователей и требуют уточнения [1]. Интерпретация иммунофенотипа является задачей врача лаборатории, от нее во многом зависят дальнейшие диагностические и терапевтические действия лечащего врача. Вместе с тем интерпретация может вызывать наибольшие затруднения, несмотря на разработанный алгоритм дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) и зрелокле-точных лимфом [4, 6], а также на предпринятые шаги по его модификации [5, 9].

Руководством по диагностике и лечению ХЛЛ (2004) обозначен спектр маркеров, рекомендуемых к обязательному определению при иммунофенотипировании [11]. Типичные клетки ХЛЛ – это В-лимфоциты, слабо экспрессирующие моноклональные мембранные иммуноглобулины, имеющие выраженную экспрессию СБ19, С05, СБ23, негативные по РМС7, в то же время характеризующиеся слабой или отсут-

Исаева Наталья Васильевна, ст. науч. сотр. лаб. иммуногематологии Адрес: 610027, Киров, ул. Красноармейская, 72 Телефон: (8332)54-51-83 E-mail: immunlab@yandex.ru

ствующей экспрессией СБ79Ь, СБ22. Известно, что при ХЛЛ возможно нетипичное сочетание перечисленных маркеров. В указанном руководстве предлагается счетная система диагностики ХЛЛ (табл. 1), согласно которой в каждом диагностическом случае на основании позитивности или негативности клеток по конкретным маркерам, а также по их степени экспрессии пациенту присваивается определенное число баллов по 5-балльной шкале и определяется иммунофенотипический счет (ИС). Предлагаемая система счета баллов не учитывает показатели экспрессии маркера СБ19, поскольку его роль состоит в исходном разделении В-клеточных ЛПЗ от Т-клеточных.

При «ХЛЛ с типичным фенотипом» сумма баллов составляет 4 или 5, другое заключение возможно при выявлении более низкой суммы баллов, а именно: «ХЛЛ с пониженным ИС» или «ХЛЛ с атипичным фенотипом».

Использование данной системы на этапе интерпретации результатов исследования может быть очень полезным, поскольку одной из частых проблем дифференциальной диагностики при ЛПЗ является разграничение между ХЛЛ и лимфомой из клеток мантийной зоны (ЛКМЗ) в стадии лей-кемизации. При этих видах ЛПЗ наблюдается совпадение морфологических характеристик лимфоцитов, циркулирующих в периферической крови.

Учитывая изложенное, актуальным является анализ вариабельности базовых иммунофенотипических маркеров у больных В-клеточными ЛПЗ на этапе диагностики, оценка ее влияния на заключение по исследованию иммунофенотипа.

Материалы и методы. Для анализа использованы данные обследования 108 пациентов с ЛПЗ, наблюдавшихся в ФГУ Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России в 2008-2011 гг. Среди них было 66 мужчин и 42 жен-

Счетная система для диагностики хЛЛ

Маркер Счетные баллы

Иммуноглобулины одного типа на мембране Слабый Сильный

CD5 Позитивный Негативный

CD23 Позитивный Негативный

FMC7 Негативный Позитивный

CD22 или CD79b Слабый Сильный

щины. Возраст больных варьировал от 35 до 86 лет, моложе 55 лет было 5 больных, медиана составила 68 лет.

У 73 больных исследование иммунофенотипа проводилось на этапе манифестации заболевания. Вместе с тем в исследование включены 35 больных, у которых диагноз был установлен ранее (1-7 лет назад) и в рамках данного исследования проведено повторное уточняющее иммунофенотипи-рование с применением трехцветного окрашивания и стандартных настроек проточного цитофлюориметра. Больные не получали специфического лечения, поскольку за этот период наблюдения у них отсутствовали признаки прогрессии заболевания.

В анализируемой группе были только пациенты с В-кле-точными ЛПЗ. Число лейкоцитов варьировалось от 7,9 до 282,8 • 109/л, лимфоцитов – от 38 до 98%; 3,58-257,3 • 109/л, В-лимфоцитов (CD3-CD19+) – от 35,1% до 98,1%; 0,83-235,5 • 109/л, Т-лимфоцитов (CD3+CD19-) – от 0,99 до 51,1%; 0,439,5 • 109/л. По данным морфологического исследования, циркулирующие в периферической крови лимфоциты расценивались как «малые». Из исследования были исключены пациенты, имевшие более 10% пролимфоцитов в лейкоцитарной формуле.

В группу наблюдавшихся намеренно не включены лица, у которых при морфологической оценке крови и пунктатов костного мозга выявлялись отростчатые лимфоциты и при стандартном иммунофенотипировании выявлялась позитивность по маркерам CD25 и/или CD1^ и /или CD103 (7 образцов). Все это позволило с достаточной степенью надежности утверждать, что в наблюдавшейся группе отсутствовали больные с лимфатическими опухолями, субстратом которых являются отростчатые лимфоциты (волосатоклеточный лейкоз и лимфома из клеток маргинальной зоны селезенки). Кроме того, в группе обследованных отсутствовали «CD10-позитивные» больные, что было расценено как отсутствие среди них больных фолликулярной лимфомой [4, 6].

Материалом для исследования являлись 103 образца периферической крови и 5 образцов костного мозга, стабилизированных К3ЭДТА. Прежде всего в них подсчитывали содержание лейкоцитов и производили их кратное разведение раствором фосфатно-солевого буфера (PBS) для достижения концентрации лейкоцитов 5 • 109/л. Это было необходимо для обеспечения стандартного соотношения между эпитопами антигенов и используемыми коммерческими конъюгатами моноклональных антител. Проводили отмывку образцов pBs методом троехкратного центрифугирования с целью удаления из них иммуноглобулинов плазмы [4]. Затем выполняли инкубирование с моноклональными антителами, меченными флюоресцеинизотиоцианатом (FITC), фикоэритрином (РЕ) и фикоэритрин-цианином-5 (РС5). Использовали трехцветные комбинации антител: CD3/CD19/CD45, K/I/CD19, FMC7/CD23/CD19, CD5/CD20/CD19, CD5/CD22/CD19, CD5/ CD79b/CD19. После инкубации проводили лизирование при помощи коммерческого реактива, содержащего фиксирующий агент (Optilyse C) с дальнейшим отмыванием PBS.

Образцы были протестированы на проточном цитофлюо-

риметре EPICS XL («Beckman Coulter»), оборудованном источником монохроматического света (лазером 488 нм). Выравнивание прибора было подтверждено при использовании калибрационных частиц Flow-Check («Beckman Coulter»), его линейность – с помощью частиц Immuno-Brite («Beckman Coulter»). Световые компенсации цитофлюориметра устанавливали с использованием CD4-PE/CD8-FITC/CD19-PC5-окрашенных образцов крови пяти доноров при гейтировании по лимфоидной популяции.

Анализ клеток в образце проводили по пяти параметрам: показателям прямого и бокового светорассеяния, флуоресценции FITC, РЕ и РС5. Первоначально по показателям светорассеяния ограничивали регион лимфоцитов, после чего, используя методы программного обеспечения, выделяли регион CD19+-лимфоцитов. Экспрессию каппа-цепи (к), ламбда-цепи (X), CD5, CD23 и FMC7 в пределах CD19+-лимфоцитов при уровне > 20% считали позитивной, при уровне Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Результаты собственных исследований авторов по изучению цитокинового профиля крови больных хроническим В-клеточным лимфолейкозом позволили установить, что закономерной особенностью изменения цитокинового статуса на разных стадиях заболевания является повышение уровней интерлейкина 4 (IL-4) и фактора некроза опухолей a (TNFa) в сыворотке крови, что может быть одним из ведущих патогенетических факторов нарушений межклеточного взаимодействия в лимфоидной ткани и развития системных метаболических и функциональных расстройств. Обнаружен параллелизм между прогрессирующим увеличением уровня IL-4, TNFa, характером качественных и количественных изменений клеточного состава периферической крови, тяжестью клинических проявлений заболевания. Показатели содержания в крови IL-4 и TNFa являются объективными диагностическими и прогностическими критериями развития патологии и соответственно могут дополнить существующие классификационные признаки стадийности течения хронического лимфолейкоза.

Ключевые слова: хронический лимфолейкоз, лимфоциты, цитокины, пролиферация, апоптоз

T.N. Jevak, N.P. Tchesnokova, T. V. Shelekhova THE DIAGNOSTIC AND PROGNOSTIC VALUE OF INCREASE OF CONCENTRATION OF PROINFLAMMATORY AND ANTI-INFLAMMATORY CYTOKINES IN BLOOD UNDER CHRONIC LYMPHATIC

The article presents the results of study of cytokine profile of blood of patients with B-cell lymphatic leukemia. It is established that at different stages of disease the regular characteristic of changes in cytokine status is the increase of concentration of interleukin 4 (IL=4) and tumor necrosis factor. This fact can be considered as one of leading pathogenic factors leading to disturbances of intercellular interaction in lymphoid tissue and to development of systemic metabolic andfunctional disorders. The parallelism between progressing increase of concentration of interleukin 4 and a-tumor necrosis factor, character of qualitative and quantitative alterations of cell structure ofperipheral blood, severity of clinical manifestations of disease are established. The indicators of concentration of interleukin 4 and a-tumor necrosis factor in blood are the objective diagnostic and prognostic criteria ofpathology development. They can complement the classification attributes of staging of the course of chronic lymphatic leukemia.

Key words: chronic lymphatic leukemia, lymphocytes, cytokines, proliferation, apoptosis

Иммунная система Часть 8 Анализы

Иммунная система Часть 8 Анализы

Помимо поражения вирусом иммунодефицита человека, вторичный иммунодефицит развивается после объемных оперативных вмешательств, обширных, тяжелых инфекций, на фоне терапии иммуноподавляющими или сильными противовоспалительными препаратами.

Исследования иммунитета помогают в оценке активности и стадии воспалительного, инфекционного и аллергического иммунного ответов, эффективности проводимой терапии. С этой целью они проводятся неоднократно.

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой позволяет выявить множество заболеваний. Он отражает состояние гемопоэза – созревания и роста клеток крови в костном мозге. О состоянии иммунной системы говорят уровни белых клеток крови – лейкоцитов и лейкоцитарная формула. Наблюдение за лейкоцитарной формулой в динамике заболевания позволит выявить осложнения, распространение инфекции по организму, реакцию на лечение.

При бактериальных инфекциях можно увидеть повышение лейкоцитов и нейтрофилов с появлением их молодых форм в крови.

При вирусных инфекциях, наоборот, лейкоциты снижаются, а в лейкоцитарной формуле преобладают лимфоциты.

Преобладание тех или иных популяций в лейкоцитарной формуле помогает в диагностике причины воспаления. Например, при определенных инфекциях (например, инфекционный мононуклеоз) нарастают измененные моноциты, а при аллергических и паразитарных заболеваниях – эозинофилы.

Наличие совсем юных клеток (бластов) в крови признак чрезмерной активации костного мозга, а низкий уровень лейкоцитов и нейтрофилов без воспаления – его угнетения.

Лимфоциты, иммунофенотипирование

Выделяют разные популяции лимфоцитов, которые играют ключевую роль в направлении иммунного ответа – клеточный или гуморальный. Определение иммунного фенотипа лимфоцита возможно в специальном исследовании методом проточной цитофлюориметрии. Фенотип лимфоцитов зависит от особых рецепторов на их поверхности – кластеров дифференцировки CD. Наличие того или иного рецептора свидетельствует о принадлежности клетки к определенной популяции лимфоцитов.

Т-лимфоциты (CD3+) общие и их подтипы:

Т- клетки-киллеры (CD3+CD16+CD56+)

Естественные клетки-киллеры (CD3-CD16+CD56+)

Лимфоциты с маркером HLA-DR+

Иммунорегуляторный индекс (Т-хелперы/Т-цитотоксические)

Дополнительно исследуют другие CD маркеры лимфоцитов для определения их активности.

Оценка результата возможна только в совокупности с данными клинической картины и иммуномодулирующей терапии. Иммунофенотипирование лимфоцитов, как правило, проводят в динамике. Так, при ВИЧ-инфекции, поражающей Т-хелперы, снижение уровня CD3+CD4+ – клеток и иммунорегуляторного индекса (CD3+CD4+/CD3+CD8+) имеет плохой прогностический прогноз по течению заболевания.

Циркулирующие иммунные комплексы и система комплемента

Антигены связываются специфическими антителами с образованием иммунных комплексов. Последние активируют комплемент, способствуют удалению чужеродных антигенов. Если их слишком много циркулирует в крови, они откладываются в тканях, например почек, кожи, легких. Высокое содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) наблюдается при аутоиммунных, хронических воспалительных и инфекционных заболеваниях. С другой стороны, определение ЦИК в крови неспецифично, не отражает ни причину их нарастания, ни непосредственное влияние на органы.

Снижение уровней ЦИК на фоне лечения говорит о затихании воспалительного процесса и эффективности терапии.

Наиболее распространенными анализами на систему комплемента являются определение ключевых С3 и С4 компонентов. Показаниями для исследования – повторяющие инфекции, ревматические и аутоиммунные заболевания для выявления врожденных дефицитов комплемента, утяжеляющих течение этих болезней.

Исследуют уровни ЦИК, С3-компонент и С4-компонент комплемента.

Иммуноглобулины A, M, G, E

Общие иммуноглобулины – показатели гуморального иммунного ответа. Уровни IgM возрастают в острый период заболевания и при обострении хронической инфекции, IgG – в процессе выздоровления, IgA – в острый период заболевания, сохраняясь дольше IgM, отражают затяжное течение и поражение слизистых оболочек. Повышенные уровни IgE свидетельствуют об аллергическом воспалении.

Общие иммуноглобулины не объясняют причину инфекции, поэтому целесообразно смотреть специфические антитела к конкретным возбудителям. Основные показания для определения общих антител – это подозрение на врожденный иммунодефицит, связанный с гуморальным иммунитетом.

Интерфероновый статус и Интерлейкины

Исследования Интерфероновый статус, Интерлейкин-1бета, Интерлейкин-6, Интерлейкин-8, Интерлейкин-10, Фактор некроза опухоли-альфа и другие определяют уровни цитокинов – специфических маркеров иммунного ответа. Помогают в определении стадии заболевания, врожденных дефектов, онкологических заболеваний, активности воспалительного процесса и осложнений. Как правило, требуют динамического контроля для помощи в оценке клинической ситуации и эффективности лечения.

Фагоцитарная активность

Фагоцитарной активностью обладают нейтрофилы, моноциты-макрофаги и другие клетки. Фагоцитоз – это способность поглощать и переваривать антигены, вплоть до целых клеток. Он определяет возможности врожденного иммунитета и необходим для формирования приобретенного иммунитета. Оценка фагоцитарной активности клеток крови трудоемка и сложна. Используют такие тесты как оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой, тест по восстановлению нитросинего тетразолия.

Фагоцитарная активность повышается при бактериальных, аутоиммунных, аллергических заболеваниях.

Ее снижение наблюдается при врожденных дефектах фагоцитарной системы, хронических инфекциях.

Иммунограмма – это общее название всех исследований иммунного статуса. И в разных лабораториях включают разное сочетание анализов в зависимости от цели обследования. Для оценки клеточного иммунитета применяют исследование иммунофенотипов лимфоцитов. Для оценки гуморального иммунитета – общие иммуноглобулины, при необходимости дополняя их ЦИК, комплементом и белками острой фазы. Для оценки врожденного иммунитета больше подходят определения цитокинов в крови, фагоцитарная активность.

Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56

ОписаниеПоказанияПодготовкаИнтерпретация

Описание исследования

Данный тест предназначен для иммунофенотипирования (оценки клеточного состава) лимфоцитов крови человека с целью определения его иммунного статуса – комплексного показателя работы иммунной системы. В качестве зондов используются моноклональные антитела, позволяющие охарактеризовать тип и функциональное состояние клеток по определенным наборам клеточных маркеров дифференциации (CD-антигенам).

Представители каждой субпопуляции лейкоцитов на разных стадиях содержат поверхностные и цитоплазматические антигены, характерные только для определенного вида и периода развития. Другими словами, CD-антигены – это антигены на поверхности клеток, по которым одни типы клеток отличаются от других. Существует стандартизация и дифференциация CD-антигенов, им присвоены определенные номера. Исследование проводится посредством метода проточной цитометрии. Он основан на выявлении фотометрических и флюоресцентных изменений отдельных клеток, проходящих вместе с жидкостью через луч монохоматического света. Метод позволяет с помощью флюоресцентно-меченых моноклональных антител посчитать количество лимфоцитов, относящихся к различным субтипам или находящихся на разных стадиях развития.

В рамках теста определяются следующие показатели:

  • Лимфоциты, абс.;
  • Т-лимфоциты (CD3+), %;
  • Т-лимфоциты (CD3+) кл/мкл;
  • Т-хелперы (CD3+CD4+), %;
  • Т-хелперы (CD3+CD4+) кл/мкл;
  • Т-цитотоксины (CD3+CD8+), %;
  • Т-цитотоксины (CD3+CD8+) кл/мкл;
  • Иммунорегуляторный индекс;
  • B-лимфоциты (CD19+), %;
  • B-лимфоциты (CD19+) кл/мкл;
  • EKK (CD3-CD16+CD56+), %;
  • EKK (CD3-CD16+CD56+) кл/мкл;
  • T-EK (CD3+CD16+CD56+), %.

Характеристика основных подтипов лейкоцитов, исследуемых в тесте:

1. Т-лимфоциты. Созревание клеток происходит в тимусе (вилочковой железе – важном органе иммунной системы, расположенном в верхнем отделе грудной клетки), откуда и пошло их название. В их задачу входит контроль работы В-лимфоцитов, отвечающих за гуморальный ответ иммунной системы – продукцию антител.

Т-хелперы – подвид Т-лимфоцитов. Поверхность данных клеток содержит структуры, способные распознавать антигены, обнаруженные вспомогательными клетками. Также они принимают участие в регуляции иммунного ответа посредством продукции цитокинов (небольших информационных молекул).

Роль цитотоксических Т-клеток состоит в распознавании фрагментов антигена на поверхности клетки-мишени, направлении своих гранул по направлению к обнаруженной мишени и высвобождении их содержимого при непосредственном контакте с ней.

2. В-лимфоциты. Вырабатываются данные клетки в лимфоидной системе (лимфоузлах и периферических органах). Поверхность этих клеток содержит антитела-рецепторы к антигенам. При контакте с антигенами происходит деление В-лимфоцитов и дифференциация их в вырабатывающие антитела плазматические клетки, которые обеспечивают гуморальный иммунитет.

3. ЕКК. Естественные (или натуральные) клетки-киллеры проявляют неиммунную цитотоксическую активность к неопластически измененным (опухолевым) клеткам-мишеням. ЕКК не относятся ни к моноцитам, ни к зрелымВ- или Т-лимфоцитам.

4. Т-ЕК проявляют естественную неиммунную киллерную активность и проявляют признаки Т-лимфоцитов.

Подготовка к исследованию

Кровь сдается строго натощак после воздержания от пищи в течение:

  • взрослые – 8-14 часов;
  • дети в возрасте 1-5 лет – 2-3 часа;
  • дети до года – 30-40 минут.

Можно пить негазированную воду. От употребления кофе, чая, соков следует воздержаться.

  • накануне обследования рекомендуется воздерживаться от физических и эмоциональных перегрузок;
  • за сутки до отбора пробы запрещено употребление алкогольных напитков, минимум за час – курение;
  • за сутки перед проведением обследования при наличии возможности и с разрешения лечащего врача исключить прием любых лекарственных препаратов;
  • непосредственно перед сдачей крови желательно 10-15 минут спокойно посидеть.

Забор крови не рекомендуется осуществлять после инструментального, ректального, мануального, рентгеновского, ультразвукового обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, флюорографии, физиопроцедур, массажа, прочих диагностических и/или терапевтических манипуляций.

Показания к исследованию

а) при наличии затяжных, хронических, рецидивирующих инфекционных заболеваний:

  • часто повторяющихся ОРВИ;
  • хронических ЛОР-заболеваниях (отитах, гнойных синуситах, рецидивирующих воспалениях легких, бронхоплевропневмониях, периодических лимфаденитах);
  • бактериальных кожных и подкожных инфекциях(фурункулезе, флегмонах, пиодермиях, септических гранулемах, абсцессах, рецидивирующих гнойных воспалениях прямой кишки (парапроктитах));
  • инфекционных заболеваниях мочеполовой системы;
  • поражении грибком кожи и слизистых оболочек;
  • заражении паразитами;
  • рецидивирующем герпесе;
  • дисбактериозе;
  • гастроэнтеропатии, сопровождаемой хроническим поносом неясной этиологии;
  • присутствии длительное время без определенных причин субфебрильной температуры, лихорадки;
  • генерализированных инфекциях (например, гнойных менингитах, сепсисе);

b) при подозрении на приобретенный или обусловленный генетически иммунодефицит;

c) при аутоиммунных заболеваниях (характеризуются атакой иммунной системой на здоровые клетки собственного организма, что приводит к поражению здоровых тканей и развитию аутоиммунных воспалительных процессов):

  • рассеянном склерозе (образовании множественных рубцов на миелиновой оболочке нервных волокон головного и спинного мозга);
  • ревматоидном артрите (поражении суставов);
  • аутоиммунном тиреоидите (воспалении щитовидной железы);
  • неспецифическом язвенном колите (рецидивирующем воспалительном заболевании толстой кишки);
  • диффузных заболеваниях соединительной ткани (склеродермии, системной красной волчанке, дерматомиозите);

d) при аллергических заболеваниях:

  • атопическом дерматите;
  • нейродермите;
  • экземе с присутствием инфекции;
  • хроническом астматическом бронхите;
  • тяжелой атопической бронхиальной астме;
  • поллинозе (сезонной аллергической реакции на пыльцу);

e) при подозрении на СПИД;

f) при онкологических заболеваниях иммунной системы:

  • болезни Ходжкина (раке лимфатических узлов);
  • саркоме Капоши (многоочаговой сосудистой опухоли);
  • лимфоме (раке, поражающем лимфатическую систему организма);
  • остром и хроническом лимфолейкозе (болезни, характеризуемой прогрессирующим накоплением злокачественных В-лимфоцитов и поражающей на начальной стадии костный мозг, лимфоузлы, селезенку, периферическую кровь);

g) с целью обследования лиц перед и после трансплантации органов;

h) перед сложными операциями;

i) при осложнениях в послеоперационный период;

j) для осуществления контроля лечения, проводимого с применением цитостатиков (противоопухолевых препаратов), иммунодепрессантов (препаратов, искусственно угнетающих иммунную систему), иммуномодуляторов (препаратов, способных менять в любую сторону ответ иммунной системы организма).

Интерпретация исследования

Абсолютное количество клеток различных подтипов лимфоцитов измеряется в клетках в микролитре (кл/мкл), относительное – в процентах (%).

Иммунорегуляторный индекс – относительный показатель, рассчитываемый как соотношение CD4+ клеток (Т-хелперов) к CD8+ клеткам (Т-цитотоксическим клеткам).

Причиной изменения в составе субпопуляций лимфоцитов могут быть различные патологии, в частности, осложнения после оперативного вмешательства, трансплантации органов, при иммунодефиците, инфекциях, онкологических, аллергических, аутоиммунных заболеваниях. В таблице ниже отражены клинические ситуации, которые могут стать причиной изменения субпопуляционного состава лимфоцитов:

Субпопуляция лимфоцитов

Показатель повышается:

Показатель понижается:

Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+CD45+)

Естественные киллеры (CD3-CD56+CD45+), (CD3-CD16+CD45+)

Т-естественные киллеры (CD3+CD56+CD45+)

Диагностического значения не имеет.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже (референсные значения указаны в графе «Нормы интерпретации»):

Ф.И.О.: Иванов Иван Иванович Пол: м Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Исследование

Результат

Нормы интерпретации

Примечание

[287] Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56

Дата выдачи (дата исследования): хх.хх.хххх

Иммунофенотипирование лимфоцитов – проведение анализа и расшифровка

здоровым людям (взрослым и детям) для оценки индивидуальных показателей иммунограммы в стабильном, здоровом состоянии. Это необходимо знать для оценки иммунного статуса пациента при заболевании в сравнении с его границами нормальных показателей. Для каждого пациента более информативна именно индивидуальная норма, нежели показатели границ нормальных колебаний из стандартного бланка анализа. В этом аспекте как раз и повышается значимость наблюдений за изменениями иммунологических показателей в динамике.

пациентам (взрослым и детям), страдающим тем или иным заболеванием (как в стадии обострения, так и при хроническом течении), для возможности сделать вывод о наличии изменений в иммунном статусе, вызванных заболеванием. При обнаружении существенных отклонений иммунного статуса от нормы в двух и более показателях, даже при отсутствии симптомов болезни, пациент относится к группе повышенного риска развития иммунопатологии.

женщинам с привычным невынашиванием беременности, при бесплодии, в том числе неясного генеза, при многократных имплантационных потерях, как однократное самопроизвольное прерывание беременности, так и привычная потеря плода в естественном цикле и после применения ВРТ (ЭКО). Это позволяет выявить особенности иммунного статуса у женщин с такими проблемами и подобрать терапию при подготовке к беременности.

женщинам и мужчинам с рецидивирующими смешанными инфекциями урогенитального тракта для исключения нарушений в системном иммунитете и развитии вторичных иммунодефицитных состояний, которые часто становятся причиной хронизации инфекционных процессов и развития резистентности к общепринятой терапии

Основные показания к назначению анализа:

рецидивирующие инфекции, инфекционные заболевания с хроническим и затяжным течением (в том числе ВИЧ, гепатиты В и С, герпес, ВПЧ);

частые простудные заболевания (бронхиты, синуситы, отиты);

хронические тонзиллиты, гаймориты;

аллергические заболевания (крапивница, бронхиальная астма, атопический дерматит, поллиноз и др.);

подозрение на генетически обусловленный (первичный иммунодефицит, ПИД) или приобретённый иммунодефицит (вторичный иммунодефицит, ВИД);

подозрение на синдром приобретённого иммунодефицита (СПИД);

обследование реципиентов до и после трансплантации органов;

обследование пациентов перед серьёзными оперативными вмешательствами; осложнённое течение послеоперационного периода;

Возможные причины повышения и снижения показателя

Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при T-клеточных лейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вирусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний. Может повышаться при приёме биологически активных добавок, длительном приёме лекарственных препаратов (особенно монотерапии), интенсивном занятии спортом и при беременности.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии; вирусных, грибковых и паразитарных хронических инфекциях; аутоиммунных заболеваниях; доброкачественных и злокачественных новообразованиях; после травмы, операций, инфаркта, кровоизлияний, ожогов, стрессов; при курении, алкогольном циррозе печени, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является однозначным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Повышение выявляется при острой фазе аллергии, при ряде Т-клеточных лимфом, практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции.

Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях, иммуносупрессивной терапии.

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях (иммунной тромбоцитопении, тиреодите Хашимото, гемолитической и В12-дефицитной анемии, синдроме Гудпасчера, хроническом активном гепатите, системной красной волчанке, ревматоидном артрите, пузырчатке обыкновенной), остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных (особенно цитомегаловирусной инфекции и хроническом вирусном гепатите) и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, остром и хроническом стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях, сепсисе, гемофилии, малярии, шистосомозе, инфекционном мононуклеозе, кори, язвенном колите, перитоните, иммунодефиците с тимомой. Является однозначным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение отмечается при аутоиммунных заболеваниях, хронических заболеваниях печени, циррозе, муковисцедозе, бронхиальной астме, паразитарных и грибковых инфекциях. Характерно в период реконвалесценции после перенесенных острых и хронических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженное увеличение наблюдается при хроническом В-лимфолейкозе.

Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

Истинные натуральные киллеры –

NK-клетки способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах, паразитарных и вирусных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортикостероидами, хроническом стрессе, дефиците цинка.

Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток

Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Т-клетки активированные (CD3+HLA-DR+D45+)

Маркер поздней и длительной активации клеток, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

В норме клетки с подобным фенотипом в кровотоке присутствуют в незначительном количестве. Они представляют собой высокодифференцированные клетки памяти

Ссылка на основную публикацию